A PCR, o reazione in catena di polimerasi, hè una tecnica utilizata per amplificà e sequenze di DNA.Hè statu sviluppatu prima in l'anni 1980 da Kary Mullis, chì hè stata premiata u Premiu Nobel in Chimica in 1993 per u so travagliu.A PCR hà rivoluzionatu a biologia moleculare, chì permette à i circadori di amplificà l'ADN da picculi campioni è studià in dettaglio.
A PCR hè un prucessu in trè tappe chì si svolge in un termociclatore, una macchina chì pò cambià rapidamente a temperatura di una mistura di reazzione.I trè passi sò denaturazione, annealing è estensione.
In u primu passu, a denaturazione, l'ADN à doppia catena hè riscaldatu à una temperatura alta (di solitu circa 95 ° C) per rompe i ligami di l'idrogenu chì mantene i dui filamenti inseme.Questu risultatu in duie molécule di DNA monocatena.
In a seconda tappa, l'annealing, a temperatura hè abbassata à circa 55 ° C per permette à i primers di annealing à e sequenze cumplementarii nantu à l'ADN monocatenariu.I primi sò pezzi brevi di DNA chì sò designati per currisponde à e sequenze d'interessu nantu à l'ADN di destinazione.
In u terzu passu, l'estensione, a temperatura hè elevata à circa 72 ° C per permette à a polimerasi Taq (un tipu d'ADN polimerasi) per sintetizà un novu filu di DNA da i primers.A polimerasi Taq hè derivata da un bacteriu chì vive in e surgenti termali è hè capaci di sustene l'alte temperature utilizzate in a PCR.
Dopu un ciclu di PCR, u risultatu hè duie copie di a sequenza di DNA di destinazione.Ripitendu i trè passi per una quantità di ciculi (tipicamenti 30-40), u numeru di copie di a sequenza di DNA di destinazione pò esse aumentata in modu esponenziale.Questu significa chì ancu una piccula quantità di DNA iniziale pò esse amplificata per pruduce milioni o ancu miliardi di copie.
A PCR hà numerose applicazioni in ricerca è diagnostica.Hè utilizatu in genetica per studià a funzione di genesi è mutazioni, in forensica per analizà l'evidenza di l'ADN, in u diagnosticu di e malatie infettive per detectà a presenza di patogeni, è in u diagnosticu prenatal per screening per i disordini genetichi in i feti.
A PCR hè stata ancu adattata per l'usu in una quantità di variazioni, cum'è a PCR quantitativa (qPCR), chì permette a quantità di DNA per esse misurata è a PCR di trascrizione inversa (RT-PCR), chì pò esse usata per amplificà e sequenze di RNA.
Malgradu e so parechje applicazioni, a PCR hà limitazioni.Hè bisognu di cunniscenze di a sequenza di destinazione è u disignu di primers appropritatu, è pò esse propensu à l'errore se e cundizioni di reazione ùn sò micca ottimizzati currettamente.In ogni casu, cù un cuncepimentu sperimentale è un'esecuzione attenta, a PCR resta unu di i strumenti più putenti in a biologia moleculare.
Tempu di Postu: Feb-22-2023